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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
Data corrente: |
28/01/2011 |
Data da última atualização: |
22/02/2011 |
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
Autoria: |
SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. |
Afiliação: |
CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS. |
Título: |
Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. |
Ano de publicação: |
2010 |
Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. |
Páginas: |
1 p. |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. MenosA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Bm86-CG; Precipitação. |
Thesagro: |
Proteína. |
Categoria do assunto: |
-- |
Marc: |
LEADER 03024naa a2200205 a 4500 001 1874908 005 2011-02-22 008 2010 bl uuuu u00u1 u #d 100 1 $aSANTOS JUNIOR, A. G. 245 $aAvaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. 260 $c2010 300 $a1 p. 520 $aA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. 650 $aProteína 653 $aBm86-CG 653 $aPrecipitação 700 1 $aCUNHA, R. C. 700 1 $aANDREOTTI, R. 700 1 $aLEITE, F. P. L. 773 $tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM.
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Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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Registros recuperados : 25 | |
3. | | SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. 1 p.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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4. | | ANDREOTTI, R.; SAIMO-KAHWA, M.; CUNHA, R. C.; BARROS, J. C.; LEITE, F. P. L. Characterization and Production of recombinant protein Ra92A from Rhipicephalus appendiculatus aiming tick vaccine antigen in Uganda. In: INTERNATIONAL CONGRESS OF PARASITOLOGY, 13., 2014, Mexico. Conference abstracts... Mexico City, Mexico: Academic Committee ICOPA Congress, 2014.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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7. | | CUNHA, R. C.; LEITE, F. P. L.; PINTO, L. da S.; SATO, T.; ANDREOTTI, R. Subclonagem do gene Bm86-CG em pPIC9 para expressão heteróloga em Pichia pastoris. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA 21.; ENCONTRO DE PARASITOLOGIA DO MERCOSUL, 2., 2009, Foz do Iguaçu. Novos horizontes em parasitologia: anais. Foz do Iguaçu: SBP, 2009. p. 1298. Revista Patologia Tropical, v. 38, jul.-set 2009. Suplemento 2.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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9. | | PINHEIRO, A. F.; MADRI, I. M.; BORSUK, S.; ANDREOTTI, R.; BERME, M. E. A.; LEITE, F. P. L. The adjuvant immune modulation effect in experimental vaccine against Neospora caninum using rNP43 expressed in Pichia pastoris. In: INTERNATIONAL MEETING ON APICOMPLEXAN PARASITES IN FARM ANIMALS, 2012, Lisbon. Apicomplexa in farm animals: proceedings. Lisboa: Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa , 2012. p.131 Poster 66, Apicowplexa2012Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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10. | | CUNHA, R. C.; PÉREZ DE LEÓN, A. A.; LEITE, F. P. L.; GUERRERO, F. D.; PINTO, L. S.; ANDREOTTI, R. Assessment of bovine immunoprotection against Rhipicephalus microplus using Bm86-CG antigen expressed in Pichia pastoris. In: AMERICAN ASSOCIATION OF VETERINARY PARASITOLOGISTS ANNUAL MEETING, 56.; LIVESTOCK INSECT WORKERS CONFERENCE, 55.; INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON ECTOPARASITES OF PETS, 11.,2011,ST. LOUIS, MO. Sustainable parasite and vector control: proceedings. St. Louis,MO: American Association of Veterinary Parasitologists, 2011. p.95Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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11. | | PINTO, N. P.; MINHO, A. P.; GASPAR, E. B.; DOMINGUES, R.; MOURA, M. Q. de; LEITE, F. P. L. Controle de Haemonchus contortus em ovinos utilizando Saccharomyces cerevisiae. In: ENCONTRO DE PÓS-GRADUAÇÃO DA UFPEL, 19., 2017, Pelotas, RS. Anais... Pelota, RS: UFPel, 2017. p. 1-4.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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12. | | ANDREOTTI, R.; MATOS, M. de F. C.; PAIVA, F.; PELLEGRIN, A. O.; LEITE, F. P. L.; VINCENT, A.; KREUTZ, F. Desenvolvimento de métodos de diagnóstico, controle e avaliação epidemiológico da neosporose. In: SIMPÓSIO EMBRAPA LABEX DE SANIDADE ANIMAL, 1., 2009, Campo Grande, MS. Anais... Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2009. 2 p. 1 CD-ROM.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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14. | | PINHEIRO, A. F.; ROLOFF, B. C.; MOREIRA, A. da S.; BERNE, M. E. A.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. Identification of suitable adjuvant for vaccine formulation with the Neospora caninum antigen NcSRS2. Vaccine, v. 36, n. 9, p. 1154-1159, February 2018Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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15. | | SANTOS JUNIOR, A. G. dos; PIRAINE, R. E. A.; CUNHA, R. C.; NIZOLI, L. Q.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. Avaliação de métodos para obtenção de proteínas recombinantes. Science and Animal Health, v.5, n.2, p. 166-177, maio/ago. 2017.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 5 |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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16. | | ANDREOTTI, R.; PRATA, M. C. de A.; GUIMARAES, M. F. M.; LÉON, A. P. de; MELO, A. K. M.; LEITE, F. P. L. Abordagem molecular no diagnóstico da resistência e no controle do carrapato-do-boi. In: SIMPÓSIO EMBRAPA LABEX DE SANIDADE ANIMAL, 1., 2009, Campo Grande, MS. Anais... Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2009. 2 p.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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17. | | CUNHA, R. C.; LEÓN, A. A. P. de; LEITE, F. P. L.; PINTO, L. da S.; SANTOS JÚNIOR, A. G. dos; SILVA, R. A. e. Bovine immunoprotection against Rhipicephalus (Boophilus) microplus with recombinant Bm86-Campo Grande antigen. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, Jaboticabal, v. 21, n. 3, p. 1-9, jul.-set. 2012.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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18. | | RODRIGUES, S. C.; LUCAS, C.; BORSUK, S.; FERNANDES, C. H.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L.; OSHIRO, L. M.; MATOS, M. de F. C.; BERNE, M. E. A. Desenvolvimento de um ELISA para diagnóstico de Neospora caninum em bovinos utilizando NCSR2 recombinante. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA 21.; ENCONTRO DE PARASITOLOGIA DO MERCOSUL, 2., 2009, Foz do Iguaçu. Novos horizontes em parasitologia: anais. Foz do Iguaçu: SBP, 2009. p. 200. Revista Patologia Tropical, v. 38, jul.-set 2009. Suplemento 2.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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19. | | RODRIGUES, S. C.; LUCAS, C.; BORSUK, S.; FERNANDES, C. H.; LEITE, F. P. L.; PINTO, L. da S.; ANDREOTTI, R.; BERNE, M. E. A. Desenvolvimento de vacinas recombinantes para o controle de Neospora caninum. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA 21.; ENCONTRO DE PARASITOLOGIA DO MERCOSUL, 2., 2009, Foz do Iguaçu. Novos horizontes em parasitologia: anais. Foz do Iguaçu: SBP, 2009. p. 122. Revista Patologia Tropical, v. 38, jul.-set 2009. Suplemento 2.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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20. | | PINTO, N. B.; GASPAR, E. B.; MINHO, A. P.; MOURA, M. Q. de; CAPELLA, G. de A.; LEITE, F. P. L. Redução da prolificidade de Haemonchus contortus em ovinos estimulados por levedura. In: ENCONTRO DE PÓS-GRADUAÇÃO, 21.; SEMANA INTEGRADA, 5., 2019, Pelotas. Anais... Pelotas: UFPel, 2019. ENPOS.Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sul. |
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